期刊：CELL

影響因子：66.85

技術服務：scRNA-seq

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盡管以 T 細胞為中心的免疫療法已經取得了無可爭議的臨床成功，但數量有限的獲得持久響應的患者迫切需要補充的治療策略。NK 細胞，作為腫瘤微環境中一類重要的組成部分參與腫瘤控制的多個過程，如直接的殺傷細胞和分泌促炎因子等。利用 NK 細胞進行癌癥治療已提出了大量的策略，其特點是有希望的特性，包括其安全性和有效性。特別值得注意的是，嵌合抗原受體（CAR)- NK 細胞治療淋巴瘤、骨髓瘤和白血病取得了顯著的臨床成功。然而，基于 NK 細胞的治療在實體瘤中受到阻礙，部分原因是對腫瘤浸潤性 NK 細胞的了解不完全，特別是它們對腫瘤的浸潤、表型異質性和 TME 內的失調。

人體中的 NK 細胞可被劃分為 2 種主要的類，CD56dimCD16hi 和 CD56brightCD16lo，主要基于 CD56 (NCAM1) 和 CD16 (FCGR3A) 的表達水平。CD56dimCD16hi NK 細胞群主要通過分泌穿孔素和顆粒酶介導靶細胞的殺傷，而 CD56brightCD16lo NK 細胞群表現出免疫調節和細胞因子產生能力。近期，單細胞 RNA 測序技術促進了腫瘤浸潤免疫細胞異質性的表征，為闡明腫瘤浸潤 NK 細胞亞群的圖譜提供了很大機會。例如，我們鑒定了 CD160+HSPA1A+ 肝常駐細胞亞型在肝細胞癌中的特異性富集，其他人則報道了出現在黑色素瘤中浸潤的特異的 NK 細胞亞群具有區域性差異。同時，人類 NK 細胞在在健康組織和血液中的分布和功能也得到了研究。然而，對于腫瘤浸潤的 NK 細胞，大多數單細胞 RNA 測序的規模是有限的，并且它們在惡性疾病中獲得的異質性表型的程度仍不清楚。

與 CD8+ T 細胞相比，NK 細胞作為細胞毒性活性的替代來源，以低突變負荷和主要組織相容性復合體（MHC) I 類異常表達來對抗腫瘤細胞。盡管 CD8+ T 細胞的功能失調狀態以細胞毒性降低和多種抑制受體的高表達為特征，但 NK 細胞功能失調尚未得到詳細研究。此前，肝癌中有 NK 細胞功能低下的報道，但尚未分析其免疫調節機制，其他癌癥類型是否也存在這種現象尚不清楚。此外，盡管 TIGIT 和 TIM3 在腫瘤浸潤性 NK 細胞中的抑制作用已經明確，但其他免疫檢查點如 PD- 1 和 CTLA4 是否在這些細胞中發揮同樣的作用甚至表達仍然存在爭議。此外，NK 細胞對 TME 的免疫抑制因子敏感，這可能導致它們的功能失調的表型，但不同的調節過程如何影響不同癌癥類型的 TME 中 NK 細胞的功能和豐度尚不清楚。總之，這些促使我們對 NK 細胞進行深入研究，以闡明它們在泛癌癥水平上的異質性和功能障礙。

在這里，我們收集了廣泛的已發表和新生成的 scRNA-seq 數據，構建了一個全面的腫瘤浸潤人類 NK 細胞圖譜，并探索了 NK 細胞在不同癌癥類型和組織中的異質性。我們揭示了腫瘤浸潤 NK 細胞狀態的轉變，并強調了可能導致 NK 細胞功能障礙的 TME 成分。這些數據將為促進對主要癌癥類型中 NK 細胞的整體特性的理解提供豐富的資源，并為基于 NK 細胞的免疫治療的發展提供有價值的見解。

1. 在單細胞分辨率水平下構建人類泛癌 NK 細胞圖譜

為腫瘤浸潤 NK 細胞構建一個綜合的泛癌單細胞轉錄組圖譜，我們首先從我們新生成的數據集中收集了 47 名診斷為 8 種癌癥類型之一的患者的 scRNA-seq 數據和 70 個其他已發表的數據集。這些數據覆蓋了 24 種癌癥類型，包括來自 716 個病人的 1223 個樣本，包括腫瘤、臨近非腫瘤組織、外周血、和其他組織如淋巴結，以及 60 名健康對照樣本（圖 1A-B)。經過嚴格的質控和計算門控（CD3CD56+/KLRF1+) 及非監督聚類結合的方法，本研究中我們獲得了 160011 個高質量的 NK 細胞，包含 11963 個新生成的 NK 細胞。值得注意的是，考慮到腫瘤組織內 NK 細胞在 CD45+ 細胞中相對較少，對它們的異質性了解的較少，因此，構建如此大規模的 NK 細胞圖譜是必不可少且有挑戰性的。與先前的來自人血液和脾臟的 7000 個 NK 細胞構建的 NK 細胞單細胞轉錄組圖譜相比，我們的規模擴大了 20 倍，代表了大多數主要的癌癥類型和多種組織。

為了無偏的定義 NK 細胞的泛癌群體結構，我們整合了數據集之間最小批次效應的單細胞 RNA 數據，并進行了 2 輪無監督聚類。第一輪分析涉及區分兩種特征明確的主要細胞類型，CD56brightCD16lo  和 CD56dimCD16hi，主要基于高表達的典型細胞標記 NCAM1 和 FCGR3A，分別對應于先前報道的“NK_1”和“NK_2”群體。CD56brightCD16lo 區可以進一步細分為 5 個子集，而 CD56dimCD16hi 區在第二輪聚類中被識別出 9 個子集（圖 1C-D)。我們沒有觀察到兩種主要大群在不同癌癥類型或不同亞群中 KLRF1 的表達有顯著差異。值得注意的是，之前報道的 ILC 細胞標記基因幾乎不在這些 NK 細胞亞群中表達，表明了我們數據的純度。這些亞群的特點是在每個主要群體中都有不同的特征基因的高表達。正如預期的那樣，先前描述的亞群很容易在我們的圖譜中被識別出來，例如 CD56brightCD16lo c5-CREM 亞群伴隨著 CREM 高表達。伴隨著 KLRC2 (NKG2C) 的高表達的 CD56dimCD16hi c8-KLRC2 NK 細胞亞群被視為適應性的 NK 細胞。我們的圖譜還發現了幾個被低估的 NK 細胞亞群，它們具有獨特的轉錄表型。例如，CD56dimCD16hi c5-MKI67 以 MKI67 和 STMN1 等增殖標志物的高表達為特征，CD56dimCD16hi c6-DNAJB1 特異性表達與應激反應相關的基因。我們的圖譜還在幾乎所有癌癥類型中捕獲了低比例的 CD56brightCD16hi NK 細胞，同時表達高水平的 NCAM1 和 FCGR3A。CD56brightCD16hi NK 細胞表現出介于 CD56brightCD16lo 和 CD56dimCD16hi NK 細胞之間的中間特征，可能代表了類似于小鼠 CD27+CD11b+ NK 細胞的發育中間體，這也被認為是小鼠的短暫成熟階段，但 scRNA-seq 幾乎無法檢測到。接下來，我們檢查了所有亞群的組織分布，觀察到不同的組織富集模式，表明我們的綜合分析可以保留不同組織的異質性 (圖 1E-F)。為了進一步證實聚類的穩定性，我們將血液、腫瘤和鄰近非腫瘤組織中的 NK 細胞分別重新聚類，結果顯示高度一致。最后，利用可以測量細胞簇純度的全局未移位熵比（ROGUE) 指數，表明所有這些群體在各種癌癥類型中都是穩健的。

NK 細胞亞群參與了不同的發育階段，其共同譜系特異性基因的表達揭示了這一點。腫瘤中富集的 CD56bright CD16lo c4-IL-7R 和血液中富集的 c2-IL-7R-RGS1lo 細胞，高表達 NK 細胞前體標志物，都是在發育早期繪制的。相比之下，其他未成熟的 CD56brightCD16lo 亞群表現出前體標志物的逐漸減少和 CD160 表達的大量增加。更成熟的 CD56dimCD16hi 亞群，特別是 c6-DNAJB1 和 c7- NR4A3，除了 FCGR3A 和 B3GAT1 (CD57) 外，還表現出殺傷免疫球蛋白樣受體（KIR) 家族的上調。不同發育狀態的 NK 細胞亞群在腫瘤中同時存在，表明 NK 細胞向腫瘤的遷移可能與 NK 細胞成熟解耦有關。

我們進一步檢查了基因表達特征，以破譯不同群體之間的功能差異（圖 1G)。CD56dimCD16hi NK 細胞高表達細胞毒效應基因，包括穿孔素（PRF1) 和除 GZMK 外的大多數顆粒酶（GZMB、GZMA 和 GZMH)，而 GZMK 只在 CD56brightCD16lo NK 細胞中表達。CD56brightCD16lo NK 細胞表達多種細胞因子基因，如 IL18。我們還觀察到 CD56brightCD16lo c2 和 c4 同時表達 il -18 及其受體 IL18R1，這意味著 il -18 依賴性自分泌途徑在這些亞群中可能起著至關重要的作用。引人注目的是，CD56dimCD16hi NK 細胞亞群也可以表現出某些細胞因子的特異性表達，但與 CD56brightCD16lo 亞群具有不同的模式。特別是，CD56dim CD16hi 亞群 c4-NFKBIA 在所有 NK 細胞亞群中表現出相對較高的炎癥評分，主要表達 CCL3、CCL4 和 CCL4L2，表明它們有能力招募其他免疫細胞，如 T 細胞。最近的研究將 1 型常規樹突狀細胞（cDC1s) 募集到腫瘤與 NK 細胞聯系起來，通過 NK 細胞分泌 XCL1、XCL2 和 CCL5 來實現。我們的研究鑒定出了通過細胞類型特異性互補策略參與 cDC1 募集的多種 NK 細胞亞群。CD56brightCD16lo c2 和 c4 表達初級水平的 XCL1 和 XCL2，而 CD56brightCD16lo (c1-GZMH 和 c3-CCL3) 和 CD56dimCD16hi (c1-IL-32 和 c8-KLRC2) NK 細胞優先表達另一個 cDC1 趨化基因 CCL5。此外，我們描述了激活和抑制受體的概況，觀察到 NK 細胞亞群的明顯變化。例如，KLRC1 在 CD56brightCD16lo NK 細胞中的表達水平高于 CD56dimCD16hi NK 細胞，盡管不是特異性的，LAG3 和 TIGIT 在 c8-KLRC2 中高表達。值得注意的是，與其他組織富集的 CD56dimCD16hi 亞群（c4-NFKBIA, c5-MKI67 和 c7-NR4A3) 相比，c6-DNAJB1 NK 細胞表現出最高的應激評分和最弱的細胞毒性，表明它們的轉錄和功能表型存在顯著差異（圖 1G)。綜上所述，我們以細粒度的亞群分辨率提供了 NK 細胞的詳細轉錄組譜。而不是分析 NK 細胞作為一個單一的群體，我們剖析 NK 細胞的亞群特異性分子特性，并揭示其未被重視的異質性。

2. 不同腫瘤類型 NK 細胞的組織異質性

接下來，我們評估了腫瘤浸潤 NK 細胞群在不同癌癥類型中的偏好，觀察到明顯的差異（Figure 2A)。例如，未成熟的 CD56brightCD16lo NK 細胞在鼻咽癌和基底細胞癌中占主導地位，而成熟的 CD56dimCD16hi NK 細胞在腎癌和肺癌中占主導地位，這與先前的報道一致。其他的，如結直腸癌和肝癌，沒有明顯的傾向（圖 2A)。為了檢驗上述趨勢是否可以用器官結構來解釋，我們分析了鄰近非腫瘤組織中主要 NK 細胞類型的內在組成及其在腫瘤中的相應變化。在某些類型的癌癥中，如結直腸癌，腫瘤組織的 NK 細胞組成與鄰近的非腫瘤組織相似。在肺癌、腎癌等腫瘤類型中，盡管腫瘤與鄰近非腫瘤組織中主要 NK 細胞類型保持不變，但 CD56dimCD16hi NK 細胞的比例明顯降低（圖 2B)。有趣的是，乳腺癌和食管癌腫瘤主要的 NK 細胞群與它們的鄰近非腫瘤組織相比是相反的（圖 2C)。這些觀察結果表明，內部器官特性和惡性腫瘤相關因素對形成 NK 細胞群的成分有復合的影響。

我們進一步從子集的角度探索 NK 細胞的癌癥類型特異性，并進行無監督聚類，根據 NK 細胞亞群比例對所分析的癌癥類型進行分層。NK 細胞亞群如 c2-CX3CR1 在胰腺癌、乳腺癌和黑色素瘤中表現出強烈的偏好。在某些亞型的癌癥類型中觀察到高變異性。例如 c4-NFKBIA 和 c7-NR4A3 從頭頸部鱗狀細胞癌和甲狀腺癌到食管癌和鼻咽癌的中位數頻率顯著降低（圖 2D)。盡管觀察到明顯的差異，但包括子宮內膜癌、基底細胞癌和食管癌在內的癌癥類型聚集在一起，均具有豐富的 CD56brightCD16hi c5-CREM 和較少的 c4-IL-7R NK 細胞。特別值得注意的是，具有上述低飽和度階段的罕見 CD56brightCD16hi NK 細胞亞群在黑色素瘤和白血病中大量存在，特別是在急性髓系白血病（AML) 亞型中（圖 2D)。NK 細胞的這種低飽和度階段與 AML 患者的總生存期和無復發生存期的降低有關。與其他 NK 細胞群相比，這些 CD56brightCD16hi 細胞在其極低的激活和抑制受體評分方面表現出獨特的表型和功能變化（圖 2E)。目前基于 NK 細胞的治療側重于增強 NK 細胞的激活和壽命，但通常忽略了癌癥類型之間的異質性和 TME 對 NK 細胞細胞毒性功能的抑制作用，這些都應該在未來的治療策略中加以考慮。

3. RGS1 是組織浸潤 NK 細胞的標志

如上所述，NK 細胞成分從血液到組織都發生了顯著變化。同樣，在組織浸潤 NK 細胞和它們的血液對應物之間檢測到廣泛的轉錄變化（圖 3A-B)。先前的研究已經確定了組織駐留 NK 細胞的幾種標記物，如 CD69、CD103、CXCR6 和 CD49a。然而，我們發現 ITGA1 (CD49a)、ITGAE (CD103) 和 CXCR6 在單細胞轉錄組水平很少被檢測到，CD69 在 NK 細胞中廣泛表達，包括血液來源的（圖 3E)。此外，有報道顯示，這些標記物在特定組織的 NK 細胞群中優先表達。這些促使我們以無偏的方式從泛癌的角度發現強大的 NK 細胞駐留標記。

我們選擇了血液和組織之間的差異表達基因，并進一步評估了它們的敏感性和特異性，以區分 NK 細胞的組織來源。因此，RGS1 (G 蛋白信號 1 的調節因子）被明確識別，它只在腫瘤和鄰近非腫瘤組織的 NK 細胞中表達，而在血液中幾乎檢測不到（圖 3C-D)。此外，RGS1 的表達與 KLF2、SELL 等遷移信號相反（圖 3E)。與上述常規組織駐留標記相比，RGS1 具有更高的敏感性和特異性。接下來，我們直接比較了 RGS1 與 ITGAE、CD69 及其聯合在血液中的表達模式，發現 RGS1 單獨在血液中的檢出率最低，而 RGS1/CD69 聯合可以進一步提高組織中的陽性檢出率（圖 3F)。此外，RGS1/CD69 聯合在區分血液和非血液 NK 細胞方面比單獨使用具有更高的曲線下面積（AUC) 值。值得注意的是，RGS1 在分析的患者和癌癥類型中廣泛表達（圖 3G-H)。

綜上所述，這些特征暗示了 RGS1 單獨或與 CD69 結合的潛在作用，在轉錄組水平上是組織浸潤 NK 細胞的優良標記物。我們推測 RGS1 的表達可能減弱 G 蛋白的信號活性，導致 NK 細胞趨化遷移能力減弱，促進 NK 細胞駐留。RGS1 在 NK 細胞中的作用機制有待進一步研究。

4. 腫瘤相關 NK 細胞程序及其特征

接下來，我們試圖闡明 NK 細胞在腫瘤中的明確特征。除了上述某些亞群在腫瘤特異性富集外，我們發現，與鄰近的非腫瘤組織相比，在腫瘤中，CD56brightCD16lo c3-CCL3 NK 細胞的細胞因子產量較低，表現為 CCL3 和 CCL4 的表達減少，并且在大多數癌癥類型中，c5-CREM NK 細胞中 XCL1 和 XCL2 的表達減少，暗示它們在腫瘤中的功能轉換。然后，我們使用 SCENIC 識別了腫瘤浸潤性 CD56brightCD16lo 和 CD56dim CD16hi NK 細胞亞群的激活調控子。重要的是，腫瘤富集的 c6-DNAJB1 亞群表現出更高的轉錄因子如 KLF6 和 EGR3 的表達，這些轉錄因子與細胞毒性功能的抑制有關。

利用 RNA 速率，我們解碼了 NK 細胞的轉錄動力學，在 CD56brightCD16lo 和 CD56dimCD16hi NK 細胞中觀察到從血液富集的亞群到腫瘤浸潤群的明確定向流動（圖 4A)。相應的，RGS1 的表達沿流速方向升高。我們發現 CD56dimCD16hi c6-DNAJB1 NK 細胞位于速率末端，從而推斷為終末狀態（圖 4A)。值得注意的是，來自鄰近非腫瘤組織的 CD56dimCD16hi NK 細胞主要觀察到在 UMPA 圖上富含 c7-NR4A3 細胞；相比之下，腫瘤來源的 CD56dimCD16hi NK 細胞在富含 c6-DNAJB1 細胞的 UMAP 圖上占優勢地位（圖 4B)。與此一致的是，腫瘤富集的 c6- DNAJB1 NK 細胞的標記物，如 DNAJB1 和 HSPA1A 在腫瘤浸潤的 CD56dimCD16hi NK 細胞群中高度表達（圖 4C)。此外，我們觀察到 c6-DNAJB1 和 c7-NR4A3 NK 細胞中線粒體基因的表達水平相似，表明 c6-DNAJB1 NK 細胞的應激表型與細胞質量無關。由于 c6-DNAJB1 細胞在腫瘤中特異性富集，我們將這一群體稱為腫瘤相關 NK (TaNK) 細胞。

多重免疫熒光染色進一步證實了腫瘤中 TaNK 細胞的存在（圖 4D)。我們還利用流式細胞術驗證了 TaNK 細胞（CD56dimCD16hi HSP40+) 在體內腫瘤的富集。在 1 例肝內膽管癌和 6 例 HCC 樣本中，我們發現了 TaNK 細胞，它們在腫瘤浸潤性 CD56dimCD16hi NK 細胞中的比例高于對應的鄰近肝組織，這與我們的 scRNA-seq 數據一致（圖 4E)。

然后，我們使用擬時序推斷分析來研究 CD56dimCD16hi NK 細胞的動態，發現 TaNK 細胞在 CD56dimCD16hi NK 細胞的推斷擬時間內越來越多地出現，并且在終末期富集，與 RNA 速率分析的結果一致。為了檢驗 TaNK 細胞的新特征，我們將基因表達譜與擬時間擬合。有趣的是，CD56dimCD16hi NK 細胞在過渡過程中表現出細胞毒性降低，抑制受體和應激基因表達升高（圖 4F)。

值得注意的是，在所有腫瘤浸潤的 CD56dimCD16hi NK 細胞亞群中，末端 TaNK 細胞具有最低的細胞毒性和最高的應激評分。相比之下，相應的 c7- NR4A3 在鄰近的非腫瘤組織中富集，具有高度的細胞毒性（圖 4G)。通過對幾種癌癥類型進行多重免疫熒光染色，我們觀察到 TaNK 細胞表現出較低水平的 GZMB (圖 4H)。肝癌患者流式細胞術分析進一步證實，與 CD56dimCD16hi HSP40+ NK 細胞相比，TaNK 細胞腫瘤部位細胞毒性顆粒（顆粒酶 B 和穿孔素）表達較低，抑制受體 CD158a (KIR2DL1) 和 CD158e (KIR3DL1) 表達較高（圖 4I -J)。這些結果表明，TaNK 細胞可能與功能失調狀態有關。此外，我們還觀察到 NR4A 核受體家族隨著擬時間順序的增加而呈現的動態差異趨勢（圖 4F)。c7-NR4A3 NK 細胞高表達 NR4A2 和 NR4A3，而 TaNK 細胞高表達 NR4A1。有趣的是，NR4A1 已被確定為 T 細胞功能障礙的關鍵介質，并被認為有助于限制實體瘤中 CAR - T 細胞的功能。總之，我們的數據表明，腫瘤中的 TaNK 細胞可能最終功能失調，并可能在 TME 中發揮關鍵作用。

5. TaNK 細胞與不良預后和免疫治療耐藥的關系

由于 NK 細胞和 CD8+ T 細胞表現出廣泛的表型和功能相似性，我們接下來研究了靶向 CD8+ T 細胞的免疫檢查點阻斷（ICB) 療法是否也會影響 NK 細胞。在腫瘤浸潤性 NK 細胞和 CD8+ T 細胞中，TaNK 細胞和耗竭 T 細胞（Tex) 表現出明顯的應激狀態（圖 5A)，提示它們參與腫瘤免疫應答。均高度表達一系列抑制受體分子；然而，它們在各種免疫調節基因上具有不同的表達譜。傳統的免疫檢查點基因如 PDCD1 和 CTLA4 在 TaNK 細胞上幾乎不表達（圖 5A)，這意味著它們不是抗 PD -1/CTLA- 4 治療的直接靶點。因此，在 TME 和當前的 ICB 治療中，TaNK 細胞可能與 Tex 細胞發揮不同的作用。

我們觀察到不同癌癥類型的 TaNK 細胞豐度存在顯著差異（圖 5B)，腫瘤時期對 TaNK 細胞比例的影響很小（圖 5C)。值得注意的是，在癌癥基因組圖譜（TCGA) 數據集中，腫瘤中的高 TaNK 細胞信號與大多數癌癥類型的低生存率相關（圖 5D-E)。我們進一步應用基于深度學習的模型進行反卷積和細胞組成分析，發現高 TaNK 細胞頻率表明癌癥患者預后不良。此外，我們通過分析先前乳腺癌和黑色素瘤的 ICB 治療研究中預處理腫瘤的 scRNA-seq 數據，進一步研究了 TaNK 細胞是否與 ICB 治療應答相關（圖 5F)。引人注目的是，在兩種癌癥類型中，無應答患者中觀察到的 TaNK 細胞比例高于應答患者。進一步利用來自各種癌癥（包括黑色素瘤、肺癌、轉移性尿路上皮癌）的已發表的大量數據，我們驗證了無應答患者比應答患者表現出更強的 TaNK 細胞信號（圖 5G)。

我們推測，長期浸潤可能賦予腫瘤中 TaNK 細胞的功能狀態，導致其對惡性細胞的無效殺傷。TaNK 細胞的富集與對抗腫瘤的免疫反應受損以及對當前 ICB 治療的低敏感性有關。我們的發現揭示了 TaNK 細胞在腫瘤中的潛在作用，并為 NK 細胞免疫療法的合理設計提供了參考。

7. 外周血 NK 細胞亞群的不同轉錄組模式

NK 細胞在血液中的淋巴細胞室中占相當大的比例，但它們在腫瘤誘導的外周免疫系統中的作用相對不明確。我們的圖譜包含來自 35 名健康供者的血液來源 NK 細胞的 9 個 scRNA 數據集，使我們能夠探測腫瘤患者外周血中 NK 細胞的特異性改變。

我們首先比較了來自健康供者的循環 NK 細胞與來自腫瘤患者的循環 NK 細胞的轉錄組特征，不同數據集的健康供者的循環 NK 細胞顯示出高度相似性（圖 7B)。相比之下，對于來自腫瘤患者的循環 CD56brightCD16lo 細胞，我們觀察到與健康供者的轉錄組存在顯著差異；在所分析的所有癌癥類型中，循環 CD56dimCD16hi 細胞的差異甚至更為顯著（圖 7A)。值得注意的是，腫瘤患者在 NK 細胞亞群中表現出顯著的組成變化，這種模式似乎是癌癥類型特異性的（圖 7C)。例如，在結直腸癌、頭頸部鱗狀細胞癌、腎癌和 HCC 中，循環 CD56brightCD16lo c3-CCL3 NK 細胞的比例增加，但在其他被分析的癌癥類型中沒有增加。

接下來，我們將重點放在 CD56dimCD16hi c8-KLRC2 適應性 NK 細胞上，該細胞在某些癌癥類型如結直腸癌和胃癌中富集（圖 7D)。適應性 NK 細胞被認為是 CAR NK 細胞的一個有吸引力的來源，因為它們具有增強細胞因子反應的效應特性和對免疫抑制效應的內在抗性。特別有趣的是，根據我們的數據，與其他循環 NK 細胞相比，這些細胞特異性表達 MHC II 類基因（圖 7E)。我們還檢查了這些 NK 細胞在腫瘤患者中的功能變化，發現與健康供體相比，患者來源的適應性 NK 細胞的功能基因和 MHC II 類基因的表達明顯更高（圖 7F, 7H)，這意味著它們在腫瘤患者中處于高度激活狀態。我們通過流式細胞術進一步證實，與健康供者相比，HCC 患者循環 NK 細胞中 MHC II 類分子的高表達（圖 7G)。因此，在患者源性適應性 NK 細胞中上調的基因參與了免疫效應過程的正調控等途徑（圖 7I)。綜上所述，我們的分析表明，循環 NK 細胞參與了腫瘤進展過程中外周免疫環境的系統性變化。

結論

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