之前我們略述了代謝組學(xué)的課題設(shè)計(jì)，按照設(shè)計(jì)的思路進(jìn)行實(shí)驗(yàn)后，就需要進(jìn)行代謝樣本的收集了。今天咱按照不同類(lèi)型的樣本，給大家提供一點(diǎn)收集的建議。

一、針對(duì)細(xì)胞類(lèi)型樣本，可分為四類(lèi)如下：

1、貼壁細(xì)胞

2、懸浮細(xì)胞

3、微生物

4、 胞外代謝產(chǎn)物

四類(lèi)細(xì)胞樣本處理方法如下：

1、貼壁細(xì)胞

去除培養(yǎng)基，采用預(yù)冷的 PBS 清洗 2 - 3 次，離心棄去上清，加入 1ml 60% 冷甲醇，把培養(yǎng)容器中的所有細(xì)胞都刮取干凈，收集在 1.5ml 離心管中，液氮速凍后 -80°C 保存。

2、懸浮細(xì)胞

離心收集懸浮細(xì)胞，用預(yù)冷的 PBS 清洗 2 - 3 次，離心棄上清，收集細(xì)胞于 1.5ml 離心管中，液氮速凍后 -80°C 保存。

3、微生物

取生長(zhǎng)對(duì)數(shù)后期的或者穩(wěn)定期中段的微生物，低溫離心（4°C, 12000rpm, 10min），沉淀微生物，去掉上清液，放入液氮中或 -80°C 保存。

4、胞外代謝產(chǎn)物

培養(yǎng)基上清收集后液氮淬滅，凍干處理后 -80℃保存。

二、針對(duì)植物樣本可按部位分為根、莖葉、果實(shí)及培養(yǎng)液等，其樣本處理方法如下：

1、根

取植物的根部 50mg 以上，用 PBS 漂洗掉根上的泥土后用吸水紙吸掉多余水分，裝入離心管，立即用液氮速凍處理 15min，于 -80°C 下保存。

2、莖、葉、花等

參照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)取特定組織部位 50mg 以上。用錫箔紙包裹并標(biāo)記后，立即用液氮速凍處理 15min，于 -80°C 下保存。

3、果實(shí)

將同組的植株種子混勻后分裝 50mg 以上至凍存管中，立即用液氮速凍處理 15min，于 -80°C 下保存。（如果果實(shí)外殼較硬，需要用粉碎機(jī)打碎過(guò)篩。）

4、植物培養(yǎng)液

直接低溫離心（4°C, 12000rpm, 10min），取上清液，移至 1.5mL 離心管，200μL 分裝后，于 -80°C 下保存。

三、針對(duì)臨床和動(dòng)物類(lèi)型樣本，其樣本處理方法如下：

主要可分為體液（血清、血漿、尿液、淚液、腦脊液等）和組織類(lèi)型（肝臟、腫瘤、肌肉、糞便等）等，處理方法如下：

1、血清

血液收集在不含抗凝劑的離心管中 4°C（或冰浴）靜置 1h 進(jìn)行凝固分層，低溫離心（4°C, 12000rpm, 10min），取上清轉(zhuǎn)移至干凈的離心管中。取上清分裝到 1.5mL 離心管中，每管 0.2mL，于 -80°C 下保存。

2、血漿

使用肝素鈉抗凝管采集全血，輕輕搖晃采血管（避免紅細(xì)胞破裂）使抗凝劑和血液充分混合，低溫離心（4°C, 12000rpm, 10min），取上清液分裝到 1.5mL 離心管中，每管 0.2mL，于 -80°C 下保存。

3、尿液

取稱(chēng)取中段尿到離心管中，低溫離心（4°C, 12000rpm, 10min），吸取澄清尿液分裝到 1.5mL 離心管中，每管 0.2mL，于 -80°C 下保存。

5、組織（肝臟、腫瘤、肌肉等）

根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)取特定組織部位，如果組織上有血液殘留，用生理鹽水將其漂洗掉，按照 100 mg/ 樣本裝入凍存管中；后立即用液氮速凍處理 15min，于 -80°C 下保存。

以上是主要常見(jiàn)的幾種樣本類(lèi)型采集方式啦，不過(guò)生物樣本類(lèi)型多樣，童鞋們有其他類(lèi)型的樣本不確定如何收集可與我們直接溝通~

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